Comparison of the effects of triamcinolone acetonide or platelet-rich plasma on expression of extracellular matrix-related genes in equine healthy chondrocytes in vitro / Comparação dos efeitos do acetonido de triancinolona ou plasma rico em plaquetas na expressão de genes relacionados à matriz extracelular de condrócitos in vitro de equinos adultos

ABSTRACT: In healthy cartilage, chondrocytes maintain an expression of collagens and proteoglycans and are sensitive to growth factors and cytokines that either enhance or reduce type II collagen synthesis. In osteoarthritis, pro-inflammatory cytokines, such as IL-6, induce overexpression of metalloproteinases (MMP) and decreasing synthesis of aggrecan. Use of chondroprotectors agents, such as Platelet-Rich Plasma (PRP) and triamcinolone (TA) are alternatives to reduce the progression of joint damage. In this study, we used chondrocytes extracted from metacarpophalangeal joints of healthy horses as the experimental model. Cells were treated in vitro with PRP or TA. No differences were observed between these treatments in comparison to the control group when the expressions of MMP9, MMP13, IL-6 and ACAN genes were evaluated (P<0.05). With these results, we can suggest that the treatments were not deleterious to equine cultured chondrocyte, once they did not stimulate MMPs and IL-6 synthesis or caused changes in ACAN.

RESUMO: Na cartilagem saudável, os condrócitos mantêm a expressão de colágenos e proteoglicanos, sendo sensíveis a fatores de crescimento e citocinas que aumentam ou reduzem a síntese de colágeno tipo II. Na osteoartrite, citocinas pró-inflamatórias, como a IL-6, estimulam a expressão de metaloproteinases (MMP) e reduzem a síntese de agrecano. O uso de condroprotetores, como o Plasma Rico em Plaquetas (PRP) e triancinolona (TA) é uma alternativa para se reduzir a progressão do dano articular. Neste estudo foram usados condrócitos extraídos das articulações metacarpofalangeanas de equinos saudáveis. As células foram tratadas in vitro com TA ou PRP. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos comparando-se com o grupo controle quanto à expressão genética de MMP-9, MMP-13, IL-6 e ACAN (p<0,05). Assim, pode-se sugerir que os tratamentos não foram deletérios ao cultivo de condrócitos, uma vez que não estimularam a síntese de MMP e IL-6 e nem causaram alterações no ACAN.

Can Triamcinolone acetonide, platelet-rich plasma, and pentosan polysulfate sodium induce oxidative stress in cultured equine chondrocytes? / Acetonido de triancinolona, plasma rico em plaquetas e pentosano polissulfato sódico podem ocasionar estresse oxidativo em cultivo de condrócitos de equinos?

ABSTRACT: Progressive deterioration and loss of articular cartilage are the final degenerative events common to osteoarthritis (OA). Reactive oxygen species (ROS) play an important role in this chondrocyte catabolic activity, leading to cell death and matrix components breakdown. Intra-articular corticosteroid injections such as triamcinolone acetonide have been used to control pain and inflammation associated with OA. New treatments for OA, platelet-rich plasma and pentosan polysulphate sodium have also been used and further investigations are necessary to determine their safety in joint cells. In this in vitro study, the use of these three substances (triamcinolone acetonide, platelet-rich plasma, and pentosan polysulphate sodium) in healthy chondrocytes did not alter the antioxidant status when compared to control groups, indicating that they could be considered safe in healthy conditions.

RESUMO: A deterioração progressiva e perda da cartilagem articular são os eventos finais da osteoartrite (OA). Espécies reativas de oxigênio (ROS) têm papel importante na atividade catabólica de condrócitos, levando a morte celular e quebra dos componentes da matriz. Injeções intra-articulares de corticosteroides, como com o acetonido de triancinolona, são usadas para controle da dor e inflamação associadas à OA. Novos tratamentos para a OA, como o plasma rico em plaquetas e o pentosano polissulfato sódico, também tem sido utilizados e necessitam de maiores investigações para determinar sua segurança para as células articulares de equinos. Neste estudo in vitro, o uso destas três substâncias (acetonido de triancinolona, pentosan polissulfato de sódio de plasma rico em plaquetas) em condrócitos saudáveis de equinos não alterou o status antioxidante quando comparado aos grupos controle, indicando que puderam ser considerados seguros em condições saudáveis.

Biomarcadores inflamatórios e indicadores de estresse oxidativo em cadelas submetidas à ovariossalpingohisterectomia convencional, por NOTES híbrida e NOTES total / Inflammatory biomarkers and oxidative stress indicators in bitches subjected to conventional ovarysalpingohysterectomy, by hybrid NOTES and by total NOTE

Objetivou-se comparar a resposta inflamatória e o perfil oxidativo da técnica de ovariossalpingohisterectomia (OSH) convencional com duas técnicas de Cirurgia Endoscópica por Orifícios Naturais (NOTES). Foram utilizados 15 fêmeas, alocadas em três grupos de cinco animais. No primeiro grupo, a OSH foi realizada por celiotomia convencional, no segundo, por NOTES total e, no terceiro, por NOTES híbrida. Foram realizadas as coletas sanguíneas antes do procedimento cirúrgico (basal), 3, 6, 12, 24, 48 e 72h pós-operatórias. A atividade da catalase manteve-se alta nos três grupos estudados, entretanto a peroxidação lipídica, medida pelos níveis dos produtos de reação com o ácido tiobarbitúrico (TBARS), ocorreu mais acentuadamente no grupo convencional e foi quase que imperceptível no grupo de NOTES total. Nos três grupos estudados, ocorreu elevação na atividade da butirilcolinesterase e acetilcolinesterases, bem como aumento leucocitário neutrofílico nas primeiras horas pós-cirúrgicas. Conclui-se que a inflamação sistêmica acontece de forma similar nas três técnicas operatórias, com ressalva para as realizadas por NOTES total que mantiveram as mais baixas taxas oxidativas.

This study aimed at comparing the inflammatory response and the oxydative profile of the conventional ovarysalpingohysterectomy (OSH) technique to Totally Natural Orifice Transluminal Endoscopic Surgery (NOTES) and Hybrid NOTES. Group of fifteen female dogs was used for each technique. Blood samples were taken before the surgical procedure (basal) and 3, 6, 12, 24, 48 and 72h postoperative. The catalase activity was increased in the three studied groups. Nevertheless, lipid peroxidation, measured by TBARS (thiobarbituric acid reactive substances) levels, was higher in the conventional group and almost indistinguishable in the total NOTES group. In the three analyzed groups, both butyrylcholinesterase and acetylcholinesterase activities were increased as well as the neutrophil counts during the first post-surgical hours. It is possible to conclude that systemic inflammation occurs in a similar way in the three operative techniques; however, total NOTES technique presents lower levels of cellular oxidative damage, particularly if compared to the conventional approach.

Óleos essenciais como substituintes de antibióticos promotores de crescimento em frangos de corte: perfil de soroproteínas e peroxidação lipídica / Essential oils as substitutes for antibiotic growth promoters in broilers: soroproteins profile and lipid peroxidation

Os óleos essenciais são alternativas ao uso de promotores de crescimento antibióticos na avicultura, devido à sua ação antimicrobiana, além de possuírem propriedades antioxidante e imunomoduladora. Este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito da suplementação dietética de três doses de óleos essenciais (OLES) de orégano (Origanum vulgare L.), sálvia (Salvia officinalis L.), alecrim (Rosmarinus officinalis L.) e extrato de pimenta (Capsicum frutescens L.) em frangos de corte, pela análise do perfil eletroforético de soroproteínas e da peroxidação lipídica plasmática. Os animais (n=910) foram alocados de forma aleatória em cinco tratamentos, com sete repetições de 26 aves cada: o grupo controle (Tc), que recebeu dieta basal sem aditivos; o grupo que recebeu promotor de crescimento antibiótico na dieta (Tatb); e os grupos T50, T100 e T150, alimentados com OLES na doses de 50, 100 e 150mg kg-1, respectivamente. Aos 42 dias de idade, sete animais foram aleatoriamente selecionados (um de cada repetição) para o estudo do perfil eletroforético de soroproteínas e para a avaliação da peroxidação plasmática de lipídeos, pelo teste de formação de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Houve diminuição na concentração de globulinas totais no T150 e na fração betaglobulina nos grupos Tatb e T150 em relação ao grupo controle e ao T50 (P<0,05). Além disso, os níveis de TBARS plasmático foram menores nos grupos que receberam OLES em comparação ao Tc (P<0,05). Dessa forma, pode-se inferir que o efeito dos OLES, na maior dose administrada, sugere menor estímulo ao sistema inume humoral de frangos de corte, assim como acontece com a suplementação de promotores de crescimento antibióticos. Adicionalmente, ocorre menor peroxidação plasmática de lipídios e, consequentemente, menos dano oxidativo em frangos de corte, em resposta ao uso dos OLES.

Essential oils are an alternative to growth promoters based on antibiotics used in animal diets, due to its antimicrobial potential, and immunomodulatory properties. Serum proteins electrophoresis and plasma lipid peroxidation were evaluated in broilers fed with diets supplemented with antibiotics or essential oils from oregano (Origanum vulgare L.), sage (Salvia officinalis L.), rosemary (Rosmarinus officinalis L.) and pepper (Capsicum frutescens L.) crude extract (OLES). The animals (n=910) were distributed within five treatment groups and seven replicates containing 26 birds each one: control group (diet without additives); the group receiving an antibiotic growth promoter diet (Tatb); and the groups T50, T100 and T150 (supplemented with 50, 100 and 150mg kg-1 of OLES, respectively). After 42 days, seven animals were randomly selected for serum proteins electrophoretic fractionation and plasma lipid peroxidation evaluation by thiobarbituric acid reactive species (TBARS) test. Total globulins (T150), betaglobulin fraction (Tatb and T150) and plasma TBARS levels in the groups that received OLES (P<0.05) presented a decrease in relation to the control group. These results suggests lower stimulus to the humoral immune response at the higher dose of OLES, as occurred in the antibiotic growth promoter group. Moreover, it suggests lower lipid peroxidation and, consequently, lower oxidative damage caused by OLES use in broiler chickens.

Suscetibilidade de Trypanosoma evansi à anfotericina B / Trypanosoma evansi susceptibility to amphotericin B

O objetivo deste estudo foi avaliar a suscetibilidade do Trypanosoma evansi in vitro e in vivo à anfotericina B. Nos testes in vitro, foram utilizadas quatro concentrações (0,06; 0,25; 1,0; 4,0µg mL-1) de anfotecicina B frente a uma suspensão de T. evansi em solução tampão fosfato rico em glicose (PBS - glicose). Para avaliar a eficácia in vivo, foram utilizados 15 ratos parasitados com T. evansi. Em dois grupos de cinco ratos infectados, doses únicas diárias de 1 (grupo A) e de 3mg kg-1 (grupo B) foram administradas via intraperitonial durante 10 dias, e a parasitemia foi avaliada por meio de esfregaço sanguíneo. Grupo C (n=5) foi utilizado como grupo controle positivo, infectados com T. evansi e não tratados, e o grupo D (n=5), como controle negativo. Os ensaios in vitro evidenciaram suscetibilidade de 100 por cento do T. evansi à anfotericina B após 7h, em todas as concentrações avaliadas. Nos ratos, nem a maior dose testada curou os roedores, apesar de ter prolongado a vida destes em comparação à vida dos animais infectados, mas não tratados. Foi também investigada a função hepática e renal dos ratos após a terapia, e os parâmetros bioquímicos analisados mantiveram-se dentro da normalidade. Conclui-se que o T. evansi in vitro é suscetível à anfotericina B. A dose 3mg kg-1 testada aumentou a expectativa de vida de ratos infectados, porém não teve efeito curativo.

The aim of this study was to evaluate the Trypanosoma evansi susceptibility to amphotericin B in vitro and in vivo. Four concentrations (0.06, 0.25, 1.0, and 4.0µg mL-1) of amphotericin B were tested against a suspension containing T. evansi and phosphate buffer solution with glucose in the in vitro assay. Fifteen rats infected with T. evansi were used for the in vivo assay. Groups A (n=5) and B (n=5) received daily doses of 1 and 3mg kg-1 during 10 days and the parasitemia was estimated daily by microscopic examination of smears. The rats from group C (n=5) were the positive control and were infected but not treated. Rats from group D (n=5) were used as negative control. in vitro assays showed a 100 percent of susceptibility of T. evansi to amphotericin B after 7 hours, at all concentrations tested. The higher dose tested did not cure the rats, although treated rats had a longer life span in comparison to the non-treated group. Adverse effects on renal and hepatic hemodynamics were also researched. Biochemical parameters obtained were within the normal ranges. It was concluded that T. evansi is susceptible to amphotericin B in vitro. The dose of 3 mg kg-1 tested in rats increased life span, but did not cure the animals.

Patogenicidade de um isolado de Trypanosoma evansi em ratos inoculados com o parasito em sangue in natura e criopreservado / Trypanosoma evansi pathogenicity strain in rats inoculated with parasite in fresh and cryopreserved blood

O objetivo deste estudo foi investigar a patogenicidade do isolado de Trypanosoma evansi (LPV-2005), em ratos (Rattus norvergicus), sob influência da imunidade passiva, de diferentes concentrações e de meios de conservação. Para tanto, foram utilizados 36 Rattus norvergicus, fêmeas, separados em seis grupos homogêneos. Os roedores dos grupos A e B foram infectados com 10(5) T. evansi, e os animais dos grupos C e D foram infectados com 10(6) tripomastigotas/animal. Os grupos E e F foram utilizados como grupo controle negativo, isto é, inoculados com sangue in natura e criopreservado sem o parasito, respectivamente. O grupo A foi formado por ratos filhos de fêmeas infectadas com protozoário, mas curadas após tratamento. Os grupos B, C e D continham roedores que nunca tiveram contato com o isolado LPV-2005. Os grupos B e C diferiram quanto à dose inoculada do flagelado mantida em cultura viva (ratos Wistar). Já os ratos do grupo D foram infectados com sangue criopreservado em nitrogênio líquido. A patogenicidade do isolado foi avaliada a partir do período pré-patente, da evolução da parasitemia e da longevidade dos animais. O grupo D apresentou um período pré-patente superior aos demais grupos. Em relação à longevidade dos animais de cada grupo, foi verificada diferença estatística significativa (P<0,05). O grupo D apresentou um período de vida de 27,8 dias, e o grupo C, de apenas 4,8 dias. Os ratos de ambos os grupos controle mantiveram-se vivos por 50 dias, quando foram eutanasiados. Portanto, a preservação do inóculo testado e a dose infectante de T. evansi influenciam a patogenicidade do isolado LPV-2005 para ratos. A presença de anticorpos maternos em ratos não impede a infecção e mortalidade por T. evansi.

This study aimed to evaluate the Trypanosoma evansi strain pathogenicity (LPV-2005) in rats under passive immunity influence, of different concentrations and media preservation. Thirty six adult female Rattus norvergicus were separated in six equal groups. Groups A and B were inoculated with 10(5) T. evansi and groups C and D with 10(6) blood trypomastigotes per animal. Groups E and F were used as negative control in which the animals were inoculated with fresh and cryopreserved blood, without the parasite. Group A were composed of T. evansi infected born rats and cured females. Groups B, C and D were composed with animals never exposed to the LPV-2005 strain. All groups B and C animals received different doses of blood trypomastigotes kept in Wistar rats, while animals from group D were infected with cryopreserved blood kept in liquid nitrogen. The the strain pathogenicity was estimated by prepatency evaluation period, levels of parasitemia and animals longevity. Group D showed a longer prepatency period in comparison with other groups. The longevity of group D (27.8 days) was significantly different (P<0.05) from group C (4.8 days). Rats of the control group were euthanized 50 days postinfection. In conclusion, the tested inoculum-preservation methods and the infective dose of T. evansi influenced the pathogenicity of the LPV-2005 strain in rats. The presence of maternal antibodies did not prevent the infection and mortality of the rats by T. evansi.

Diabete insípido central em um cão / Central diabetes insipidus in a dog

Descreve-se um caso de diabete insípido central em um cão, fêmea, nove anos de idade, sem raça definida, com história de poliúria e polidipsia há 18 meses. Com o exame físico, nenhuma alteração sistêmica foi elucidada. Já nos exames laboratoriais complementares, observou-se policitemia e hiperproteinemia, e a densidade específica da urina (1002) encontrava-se abaixo do limiar fisiológico. O animal foi submetido à privação hídrica e se mostrou incapaz de concentrar a urina durante as sete horas observadas, tempo que levou para apresentar 5 por cento de desidratação. Após isso, foi administrado acetato de desmopressina e, 5 horas após, a densidade estava em 1028, confirmando o diabete insípido de origem central. O animal recebeu terapia à base de acetato de desmopressina, apresentando melhora do quadro clínico.

A case of central diabetes insipidus in a nine-year-old female dog is described. The dog presented intermitent polyuria and polydipsia in the past 18 months. In the clinical exam, complete blood count, alanine transaminase, alkaline phosphatase, BUN, creatinine, glucose and calcium dosages were normal. However, the specific urine gravity was low and presented the value 1002. The dog was unable to concentrate the urine during the seven hours of water deprivation test and presented 5 percent of dehydratation. The administration of desmopressin acetate elevated the specific urine gravity to 1028 five hours after the beginning of the treatment, confirming the diagnosis of diabetes insipidus of central origin.

Resposta eritropoética de ratos em diferentes graus de parasitemia por Trypanosoma evansi / Erithropoietic response in Trypanosoma evansi infected rats with different parasitaemia intensity

O Trypanosoma evansi é um protozoário hemoflagelado que causa, em várias espécies, uma doença caracterizada por altos níveis de parasitemia, com rápido desenvolvimento de anemia. Este trabalho teve como objetivo investigar a relação entre o grau de parasitemia e a alteração na eritropoese de ratos (Rattus norvegicus) da linhagem Wistar infectados experimentalmente com T. evansi. Foram utilizados 42 ratos, dos quais 36 foram inoculados pela via intraperitoneal com 0,2ml de sangue, contendo 2,5 x 104 parasitas. Seis ratos não-inoculados foram utilizados como controles. Após inoculação, a parasitemia foi avaliada a cada 12h. Os grupos para análise foram estipulados de acordo com a média de tripanossomas em 10 campos homogêneos focados aleatoriamente, sendo: A, controle; B, animais que apresentaram um grau de parasitemia entre 1-10 tripanossomas/campo; C, ratos com 11-20 tripanossomas/campo; D, ratos com 21-30 tripanossomas/campo; E, ratos com 31-40 tripanossomas/campo; F, 41-50 tripanossomas/campo; e G, ratos com mais de 51 tripanossomas/campo. Quando os animais apresentaram o número de protozoários equivalente ao grupo, foram coletadas amostras de sangue para realização de hemograma e dosagem de ferro, e foi realizada citologia de medula óssea para avaliação da relação mielóide:eritróide. A análise estatística mostrou redução significativa das hemácias e do hematócrito a partir de 31 tripanossomas/campo (grupos E, F e G; P<0,005) e a redução de hemoglobina ocorreu a partir de 41 tripanossomas/campo (grupos F e G; P<0,005). A relação mielóide:eritróide foi reduzida de 0,7 para 0,6 a partir de 41 tripanossomas/campo (grupos F e G; P<0,005). Não foram detectadas variações na concentração de ferro. Os dados obtidos demonstraram que ratos com parasitemia acima de 31 tripanossomas por campo desenvolvem uma anemia aguda, com um aumento compensatório na atividade hematopoética.

Trypanosoma evansi is a flagellate protozoan that causes a disease characterized by high parasitemia and acute anemia in various species. This study was aimed at evaluating and establishing a relationship between different parasitemia levels and eritropoyesis in Wistar rats (Rattus norvegicus) experimentally infected by T. evansi. Forty two animals were used. In 36 animals parasites were inoculated by intraperitoneal blood injection of 0.2ml containing 2.5x104 parasites. Six non-inoculated animals were used as controls. Parasitemia was evaluated every 12 hours and the animals were allocated in groups according to parasitemia levels. Then they were classified according to average number of parasites in 10 random homogeneous fields, Group A: control (not-inoculated); B: rats with 1-10 trypanosomes/field; C: 11-20 trypanosomes/field; D: 21-30 trypanosomes/field; E: 31-40 trypanosomes/field; F: 41-50 trypanosomes/field; G: more then 51. Blood samples were taken when the animals reached the correspondent group number of parasites. Hemogram and iron levels were evaluated and a bone marrow cytology was performed to detect the myeloid:erythroid ratio. Statistical analysis showed a significant reduction on red blood cells count and hematocrit from group E on and also hemoglobin on groups F and G. The myeloid:erythroid ratio reduced from 0.7 to 0.6 on groups F and G (P<0.005). Iron levels alterations were not detected. These data showed that Wistar rats with parasitemia higher then 31 parasites per field have an acute anemia associated to a compensatory hematopoietic activity.